Kontaminationskontrolle

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Onar^®EUB und Onar^®qEUB Bacteria Detektion Kits für die konventionelle PCR und die qPCR

ASSAYS FÜR DIE IN VITRO DIAGNOSE VON EUBAKTERIEN

Onar^®EUB Bacteria Detection Kit ist der erste PCR Assay, der für die genaue und zuverlässige Diagnose von Eubakterien entwickelt wurde. Der Kit verschafft jedem Labor eine einfache und schnelle Methode eubakterielle Kontaminationen in Zellkulturen und anderen biologischen Materialien nachzuweisen.

Der Onar^®qEUB Bacteria Detection Kit ermöglicht den semiquantitativen Direktnachweis von Bakterien in biologischen Proben wie Zellkulturen, Zellkulturprodukten oder Kulturmedien. Der Kit enthält alle Reagenzien (Primer, Nukleotide, Sonden, Polymerase und Reaktionspuffer), die für die Durchführung des Nachweises notwendig sind. Eine Positivkontrolle liegt dem Kit bei. Der Kit ist mit allen handelsüblichen qPCR Cyclern anwendbar.

Validieren Sie Ihre experimentellen Ergebnisse

Regelmäßiges Testen Ihrer Zellkulturen auf eubakterielle und Mykoplasmen-Kontaminationen entscheidet über die Zuverlässigkeit Ihrer Ergebnisse. Neben den Detektionskits Onar^®EUB und Onar^®qEUB Bacteria Detection Kit für Bakterien bietet Minerva Biolabs Detektionskits für Mykoplasmen und und diverse Dienstleistungen z.B. für Virenkontaminationen als mittels konventioneller PCR oder qPCR an.

Ihr Nutzen

• Sensitiv
  Für eine Detektion sind weniger als 12 Kopien genomischer DNA (z. B. von Bacillus subtilis) pro Testansatz ausreichend.
• Spezifisch
  Detektion von mehr als 45 Eubakterien: Actinomyces, Bacillus, Enterococcus, Escherichia coli, Fusobacterium, Klebsiella, Lactobacillus, Micrococcus, Mycobacterium, Peptostreptococcus, Pseudomonas, Porphyromonas, Prevotella, Salmonella, Serratia, Staphylococcus, Streptococcus, etc.
• Zuverlässig
  Der Kit enthält eine positive Kontroll-DNA, und eine interne Kontroll-DNA, um die Möglichkeit eines falsch-positiven Resultates ausschliessen zu können.
• Praktisch
  Die Reagenzien sind vor-aliquotiert für jeweils 25 Reaktionen für einezweckmässige periodische oder Routinetestung.
• Onar^®qEUB Bacteria Detection Kit enthält zudem die EUB-Polymerase
• Einfach
  Einfache Auswertung durch Vergleich mit der Positivkontrolle.

Vorteile von Onar^®qEUB Bacteria Detection Kit

• Einfache Handhabung
  Der Kit enthält alle Reagenzien für den Nachweis (Primer, Nukleotide, Sonden, Polymerase und Reaktionspuffer). Eine Positivkontrolle liegt dem Kit bei.
• Universell einsetzbar
  Der Kit ist mit allen handelsüblichen qPCR Cyclern anwendbar.

Testprinzip

Onar^®EUB Bacteria Detection Kit basiert auf der Polymerase Ketten Reaktion (engl.: polymerase chain reaction, PCR) und gewährleistet somit höchste Sensitivität für die Detektion von eubakteriellen Kontaminationen in Zellkulturen und verschiedenartigsten biologischen Probenmaterialien. Für eine erfolgreiche Detektion sind bereits 12 Eubakterien (z. B. Bacillus subtilis) pro Testansatz (2,4 Keime/µl) ausreichend. Durch die Verwendung eines universellen, jedoch hoch konservierten Abschnitts des 16S RNA-Genoms werden verschiedenste Bakterien, jedoch keine eukaryontische DNA nachgewiesen.

Der Nachweis liefert innerhalb von 3,5 Stunden zuverlässige Ergebnisse. Die Handhabung ist dabei sehr einfach. Nach DNA-Extraktion mit einem handelsüblichen Extraktionskit kann die Probe direkt in die PCR eingesetzt werden. Nach nur einem PCR-Durchgang liefert die Gelelektrophorese eine einfache und klare ja/nein-Aussage. Jeder Kit enthält eine Amplifikationskontrolle (interne Kontrolle) und eine Positivkontrolle zur einfachen Auswertung. Im Prinzip kann der Kit mit jeder Polymerase kombiniert werden. Jedoch sind Polymerasen verschiedenster Hersteller nicht selten mit bakterieller DNA kontaminiert und führen daher zu falsch-positiven Ergebnissen. Wir empfehlen daher die ausschliessliche Verwendung der EUB -Polymerase (Cat. No.: 54-0100) im Zusammenhang mit Onar^®EUB Bacteria Detection Kit.

Hintergrund

Bakterielle Kontaminationen treten häufig auf

Die Meinung, dass Bakterienkontaminationen durch mitgeführte Antibiotika sicher verhindert oder schnell organoleptisch, also durch Farbumschlag und Trübung, erkennbar werden, hat schon zu zahlreichen Versuchsabbrüchen und nicht reproduzierbaren Ergebnissen geführt. Bakterien können wie die Mykoplasmen in Zellkulturen unterschwellig existieren oder auch nur langsam zu visuell erkennbaren Titern heranwachsen. Studien haben gezeigt, dass die Inzidenz bakterieller Kontaminationen in der Zellkultur bei mindestens 6% liegt. Das heisst, dass viele Zellkulturen deutliche, also visuell erkennbare Zeichen einer bakteriellen Kontamination ermangeln. Zudem wurde demonstriert, dass viele Antibiotika nicht nur unwirksam gegenüber resistenten bakteriellen Infektionen sind, sondern auch einen gravierenden Einfluss auf den Metabolismus, das Zellwachstum und die Differenzierung haben.

Komponenten des Onar^®EUB Bacteria Detection Kit

• Primer und Nukleotide bei optimialen Konzentrationen
• positive Kontrolle für die einfache Verifikation der Ergebnisse
• interne Kontrolle, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu gewährleisten
• Handbuch

Anm.: Wir empfehlen die ausschliessliche Verwendung von EUB -Polymerase (Cat. No.: 54-0100) im Zusammenhang mit Onar^®EUB Bacteria Detection Kit.

Onar^®EUB Bacteria Detection Kit wird in lyophylisiertem Zustand ausgeliefert und ist bei +2 bis +8 °C mindestens 12 Monate haltbar. Die Primer und Nukleotide sind á 25 Tests aliquotiert, um eine gleichbleibende Qualität zu gewährleisten. Nach erfolgter Rehydratisierung müssen die Reagenzien bei mindestens -18 °C gelagert werden.