Kontaminationskontrolle

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PCR Quantifizierungsstandards (QS)

Der PCR Quantifizierungsstandard ist genomische DNA extrahiert aus Zellen einer frühen Passage definierter Mykoplasmen oder Legionellen, die in Flüssigmedium gemäß der European Pharmacopoeia oder in Hayflick´s Medium kultiviert wurden. Die Extraktion der DNA wird mit Absorptionssäulen durchgeführt, anschließend wird die DNA durch Phenol/Chloroform Extraktion und Ethanol-Fällung gereinigt. Die Konzentration wird photometrisch bestimmt und durch die qPCR Methode verifiziert. Die entsprechende DNA Konzentration wurde durch Verdünnen der DNA in DNA-stabilisierenden Puffer erreicht. Genomische DNA wird als Kontroll-Template für DNA Amplifikationstests in der konventionellen PCR verwendet (z. B. Im Zusammenhang mit der Kontaminationskontrolle in der Zellkultur). Im Bereich der qPCR Technologie wird der titrierte DNA Standard mit definierter Konzentration von genomischen Kopien zum Kalibrieren und Generieren von Standardkurven verwendet. Dazu wird die Lösung in Verdünnungsserien (10fache Verdünnungen) mit dem Tris-HCI Puffer als PCR Probe eingesetzt.

Anwendung

DNA-Standards erlauben die Durchführung von Kontrollreaktionen bei der PCR im Zusammenhang mit qPCR Tests. Sie dienen dazu, Standardkurven für Quantifizierungsexperimente zu erstellen, z. B. mit dem Venor^®Mp Mycoplasma pneumoniae Diagnostik Kit für die qPCR. DNA Standards werden zudem als allgemeine Kontrolle von qPCR Systemen angewandt und für die Validierung von Detektionslimits in bezug auf die konventionelle PCR.

Inhalt

1 Gefäß (grüner Deckel) Standard DNA, 100 µl, enthält 10⁶ Genome/µl.

3 Gefäße (weisser Deckel) mit 1 ml DNA freiem Wasser.

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