Zubehör

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Thermal Cycler Color Compensation Kit

Anwendung

LightCycler^®480 I oder II

Inhalt

Der Kit beinhaltet die zur Durchführung eines Color Compensation Experiments benötigten Kalibrierlösungen sowie einen Reaktionspuffer zur Ermittlung der Hintergrundfluoreszenz.

Durchführung eines Color Compensation Experiments

Obwohl die Filter in Multiplex-PCR-Geräten auf die häufig verwendeteten Fluoreszenzfarbstoffe optimiert sind, kann dennoch gelegentlich Crosstalk beobachtet werden. Mit einem Color Compensation Experiment kann dieser Crosstalk korrigiert und die Interpretation des durchgeführten Multiplex-Assays erleichtert werden.

Die Kalibrierlösungen enthalten fluoreszenz-markierte Oligonucleotide für die Bestimmung des Crosstalks, der von den in einem Multiplex-Assay verwendeten Farbstoffen jeweils erzeugt wird sowie einen Reaktionspuffer ohne Farbstoffe zur Ermittlung der Hintergrundfluoreszenz des Puffers.

Die Color Compensation erzeugt ein Compensation-File auf dem LightCycler^® 480 I oder II System, das eine eindeutige Interpretation von Multiplex-Experimenten ermöglicht. Folglich kann das erzeugte File für die Interpretation der PCR-Assays mit unserem Onar^®MRSA Detection Kit oder anderen Kits, die diese Farbstoffe verwenden, eingesetzt werden.

Da sich Real-time-Geräte oft in der Sensitivität der gemessenen Fluoreszenz unterschieden, sollen Color Compensation Experimente für jedes Multiplex-PCR-Gerät spezifisch durchgeführt werden.

Im Fall von Überkompensation oder verbleibendem Crosstalk wird empfohlen, die Konzentration des Kalibrierfarbstoffes, der für das Color Compensation Experiment verwendet wird, so anzupassen, dass ein ähnliches Level des (absoluten) Fluoreszenzisignals gemessen wird.